土壤微生物RAPD分析体系的优化研究

生态学杂志 ›› 2005, Vol. ›› Issue (8): 921-924.

土壤微生物RAPD分析体系的优化研究

焦晓丹¹, 吴凤芝¹, 高海军²

1. 东北农业大学园艺系, 哈尔滨, 150030;
2. 建三江大兴农场, 建三江, 156303

收稿日期:2005-01-12 修回日期:2005-01-24 出版日期:2005-08-10
通讯作者: 吴凤芝
基金资助:
国家自然科学基金(30230250);黑龙江省自然科学基金资助项目(C0215).

Optimization of RAPD conditions for soil microbes

JIAO Xiaodan¹, WU Fengzhi¹, GAO Haijun²

College of Horticulture, Northeast Agricultural University, Haerbin 150030, China

Received:2005-01-12 Revised:2005-01-24 Online:2005-08-10

摘要/Abstract

摘要： 采用正交实验设计,对影响土壤微生物RAPD扩增体系的Mg²⁺、dNTP浓度及引物浓度进行了研究,同时对退火温度、延伸时间及循环次数进行摸索。结果表明,适宜土壤微生物PCR扩增反应在25μl体积中进行,包括7ng土壤微生物DNA样品、20pm随机引物、1.5uTaq酶、3.0mmol.L^-1Mg-CL2和0.2mmol·L^-1dNTP。PCR扩增反应进程如下:94℃3min,使土壤DNA变性;然后再进行39个循环,每个循环包括94℃1min,37℃40s,72℃90s,结束后72℃延伸7min。

关键词: 流域, 生态系统, 森林, 水量平衡

Abstract: With orthogonal experiment,this paper studied the effects of the concentrations of Mg²⁺,dNTP and primer,the anneal temperature,and the extending time and cycling times on RAPD of soil microbes.The results showed that the feasible PCR reaction system for soil microbes should be carried in 25 μl volume,which was composed of 7 ng soil microbial DNA template,20 pm random primer,l.5 uTaq enzyme,3.0 mmol·L^-1 Mg-CL₂,and 0.2 mmol·L^-1dNTP.The PCR reaction procedure was firstly,keeping 94 for 3 min to make soil microbial DNA denatualize followed by 39 cycles,each including 94 for 1 min,37 for 40 s,and 72 for 1.5 min,and finally,keeping 72 for 7 min for extending.

Key words: Watershed, Ecosystem, Forest, Water balance

中图分类号:

S512

焦晓丹, 吴凤芝, 高海军. 土壤微生物RAPD分析体系的优化研究[J]. 生态学杂志, 2005, (8): 921-924.

JIAO Xiaodan, WU Fengzhi, GAO Haijun. Optimization of RAPD conditions for soil microbes[J]. cje, 2005, (8): 921-924.

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