药用植物内生真菌是重要的拮抗微生物资源,但目前对中国国家地理标志产品、湖北省道地药材蕲艾(
Artemisia argyi var.
argyi cv. Qiai)内生真菌的研究较少。采用组织研磨法,从蕲艾根、茎和叶中分离内生真菌,以5株多重耐药菌和5种常见人类致病菌为指示菌,采用滤纸片法筛选蕲艾内生真菌发酵液乙酸乙酯提取物的抑菌活性;并通过扩增ITS序列,对复筛菌株进行分子生物学分类鉴定。一共从蕲艾中分离得到71株内生真菌,其中13株对2种及以上指示菌有抑菌作用,且来源于叶片的有效菌株共9株,占比(69.2%)最高。菌株黑曲霉(
Aspergillus niger YX-Y-12)和乌达加威曲霉(
Aspergillus udagawae HQY-Y-15)分别对耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(carbapenem-resistant
Acinetobacter baumannii,CRAB)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant
Staphylococcus aureus,MRSA)具有较强的抑菌活性,其中菌株YX-Y-12发酵液提取物对CRAB-1的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)均为0.832 mg·mL
-1;菌株HQY-Y-15发酵液提取物对MRSA的MIC和MBC分别为0.052和0.208 mg·mL
-1;这13株菌隶属于1门3纲4目6科6属:曲霉属(
Aspergillus)、青霉属(
Penicillium)、枝孢霉属(
Cladosporium)、镰刀菌属(
Fusarium)、枝顶孢霉属(
Acremonium)和尾孢属(
Cercospora),其中曲霉属有5株,占38.5%。本研究从植物中分离到托姆青霉(
Penicillium thomii)和甜菜生尾孢(
Cercospora beticola),并发现
P. thomii、菌核枝顶孢(
Acremonium sclerotigenum)和极细枝孢霉(
Cladosporium tenuissimum)发酵液乙酸乙酯提取物对人类致病菌有抑菌活性;还发现
A. niger对CRAB、梅花状青霉(
Penicillium herquei)对MRSA和金黄色葡萄球菌、
A. udagawae对单核细胞增生李斯特菌/MRSA/金黄色葡萄球菌、
C. beticola对普通变形杆菌和大肠杆菌以及枝孢样枝孢霉(
Cladosporium cladosporioides)对普通变形杆菌有抑菌活性,且蕲艾内生真菌
A. udagawae HQY-Y-12可能是潜在新种。上述结果为深入挖掘蕲艾功能内生真菌作用机制奠定了基础,并为开发新型抗菌物质提供了菌种资源。