生态学杂志 ›› 2009, Vol. 28 ›› Issue (12): 2444-2451.
于华会1;杨志玲1**;杨旭1;谭梓峰1;舒枭2
YU Hua-hui1|YANG Zhi-ling 1|YANG Xu1;TAN Zi-feng1|SHU Xiao2
摘要: 以厚朴DNA为模板,利用正交试验分别对影响厚朴ISSR-PCR反应的Taq 酶浓度、dNTP浓度、引物浓度、Mg2+浓度、模板DNA浓度进行了优化,并通过梯度PCR确定不同引物的最佳退火温度和循环次数,最终确定厚朴最佳反应体系及扩增条件为:25 μl体系,其中包括1.5 mmol·L-1MgCl2,0.3 μmol·L-1引物,0.04 U·μl-1Taq酶,0.2 mmol·L-1 dNTP,4 ng·μl-1 模板DNA,1×Buffer;扩增程序:94 ℃预变性5 min,94 ℃变性30 s,50 ℃~60 ℃(退火温度随引物不同而定)退火45 s,72 ℃延伸90 s,共40个循环,然后72 ℃延伸8 min,4 ℃终止反应。此外,还利用优化的反应体系成功筛选出21条ISSR引物,并利用部分引物对厚朴个体进行了遗传多样性分析。